Monkeypox Virus Kete PCR Wā Tuturu
Taipitopito hua
Whakamahinga Whakamahinga
Ka whakamahia mo te tirotiro i te Monkeypox Virus i roto i te serum tangata, i nga tauira exudate lesion ranei ma te whakamahi i nga punaha PCR tuuturu.
Tikanga Whakamatau
Ko tenei hua he punaha tirotiro a Taqman® i runga i te wa-tuuturu mo te tirotiro PCR.Kua hoahoatia nga kaupapa tuatahi me nga rangahau mo te kimi i te ira F3L o Monkeypox Virus.Ko te mana o roto e aro ana ki te ira i tiakina e te tangata ka aro turuki i te kohinga tauira, te whakahaere tauira me te mahi PCR i nga wa tuturu hei karo i nga hua kino kino.Ko te kete he punaha lyophilized premix katoa, kei roto nga rauemi e hiahiatia ana mo te Monkeypox Virus detection: waikawa nucleic amplification enzyme, UDG enzyme, parepare tauhohenga, tuatahi me te tirotiro.
Ihirangi Matua
Kua whakarārangitia ngā wāhanga e whakaratohia ana ki te ripanga.
| Waehanga | Mōkī | Kai whakauru |
| Virus MonkeypoxWhakaranuhia te Lyophilized Premix | 8 ngongo PCR tango× 6 peke | Pūmua, rangahau, dNTP/dUTP Mix, Mg2+, Taq DNA polymerase, UDG Enzyme |
| MPV Mana Pai | 400 μL×1 ngongo | Nga raupapa DNA kei roto i te ira Target |
| MPV Mana kino | 400 μL×1 ngongo | Ko nga raupapa DNA kei roto te wahanga ira tangata |
| Whakarewa Rongoa | 1 mL×1 ngongo | Pūmau |
| Tiwhikete Whakaaetanga | 1 wahi | / |
Rere Mahi
1. TauiraKohinga:Me kohia nga tauira ki roto i nga ngongo parakore
me nga whakaritenga hangarau paerewa.
2. Reagent Preparation (Reagent Preparation Area)
Tangohia nga waahanga o te kete, whakataurite i te pāmahana rūma mo te whakamahi tūtatari.
3. Tukatuka Tauira (Whahanga Tukatuka Tauira)
3.1 Tangohanga waikawa nucleic
E taunaki ana kia tangohia nga tauira wai 200μL, Mana Pai me te Mana Kino mo te tangohanga waikawa karihi, kia rite ki nga whakaritenga me nga tikanga o nga kete tangohanga DNA viral.
3.2 Whakarewa paura Lyophilized me te taapiri tauira
Whakapaia te Monkeypox Virus Lyophilized premix i runga i te maha o nga tauira.Ko tetahi tauira e hiahia ana kia kotahi ngongo PCR kei roto te paura premix Lyophilized.Ko te mana kino me te mana pai me waiho hei tauira e rua.
(1) Tāpirihia he 15μL Whakarewa Whakarewatanga ki ia ngongo PCR kei roto te Lyophilized premix, katahi ka tapirihia he tauira 5μL kua tangohia/ Mana Kino/ Mana Pai ki ia ngongo PCR.
(2) Hipotia nga ngongo PCR, peia nga ngongo PCR ma te ringaringa kia rewa katoa te paura lyophilized me te whakaranu, kohia te wai ki raro o nga ngongo PCR ma te tere tere tere.
(3) Mēnā ka whakamahia noa te taputapu PCR wā-tūturu kia kitea, katahi ka whakawhiti tika i nga ngongo PCR ki te waahi whakakaha;ki te whakamahi i te BTK-8 mo te rapunga, me mahi nga mahi e whai ake nei: whakawhiti 10 μL wai mai i te ngongo PCR ki te pai o te maramara tauhohenga o BTK-8.Kotahi te ngongo PCR e rite ana ki tetahi puna i runga i te maramara.I te wa o te mahi paipa, me whakarite kia 90 nga nekehanga poutū te pipette.Me whakanoho nga tohutohu paipa arai aerosol ki waenganui o te puna me te kaha o te kaha, ka mutu te pana i te pipette ina tae ki te taputapu tuatahi (kia karo i nga mirumiru).Kia whakakiia nga puna, tangohia he kirikiri maramara tauhohenga hei uhi i nga puna katoa, katahi ka whakawhitia te maramara ki te waahi rapunga whakakaha.
4. Whakanui PCR (Whahanga Rapu)
4.1 Kuhua nga ngongo PCR/te maramara tauhohenga ki roto i te taika tauhohenga ka whakanoho pai nga ingoa o ia tauhohenga ki te raupapa e rite ana.
4.2 Tautuhinga mo te rapunga o te rangi: (1) Monkeypox virus (FAM);(2) Mana Roto (CY5).
4.3 Whakahaerehia te kawa paihikara e whai ake nei
Kawa o ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| Nga hikoinga | Te pāmahana | Te wa | Nga huringa | |
| 1 | Tuhinga o mua | 95℃ | 2 min | 1 |
| 2 | Te whakahekenga | 95℃ | 10 s | 45 |
| Te whakawhanaunga, te toronga, te whiwhi fluorescence | 60 ℃ | 30 s | ||
Kawa o BTK-8:
| Nga hikoinga | Te pāmahana | Te wa | Nga huringa | |
| 1 | Tuhinga o mua | 95℃ | 2 min | 1 |
| 2 | Te whakahekenga | 95℃ | 5 s | 45 |
| Te whakawhanaunga, te toronga, te whiwhi fluorescence | 60 ℃ | 14 s | ||
5. Te tātari i nga hua (tirohia te pukapuka-whakamahi taputapu)
I muri i te tauhohenga, ka tiakina aunoa nga hua.Patohia te "Atatari" ki te tātari, ka whakamaori aunoa te taputapu i nga uara Ct o ia tauira i roto i te pou huanga.Ko nga hua whakahaere kino me te pai ka rite ki enei e whai ake nei "6. Mana Kounga ".
6. Mana Kounga
6.1 Mana Kino: Kore he Ct, he Ct>40 ranei i te hongere FAM, Ct≤40 i te hongere CY5 me te pihi whakakaha noa.
6.2 Mana Pai: Ct≤35 i roto i te hongere FAM me te anau whakakaha noa, Ct≤40 i te awa CY5 me te arai whakakaha noa.
6.3 Ka whai mana te hua mena ka tutuki nga paearu katoa i runga ake nei.Ki te kore, he muhu te hua.
Whakamaoritanga Hua
Ko nga hua e whai ake nei ka taea:
| Ct uara o te hongere FAM | Uara Ct o te hongere CY5 | Whakamaori | |
| 1# | Kaore he Ct, Ct>40 ranei | ≤40 | Monkeypox huaketo kino |
| 2# | ≤40 | Tetahi hua | Monkeypox huaketo pai |
| 3# | 40～45 | ≤40 | Whakamatautau ano;mena kei te 40~45 tonu, ripoatahia hei 1# |
| 4# | Kaore he Ct, Ct>40 ranei | Kaore he Ct, Ct>40 ranei | He muhu |
FAKATOKANGA: Ki te puta he hua kore, me kohia te tauira me te whakamatau ano.
Nga korero ota
| Ingoa Hua | ngeru.Kao | Rahi | Tauira | Te Ora Papa | Whakawhiti.& Sto.Temp. |
| Monkeypox Virus Kete PCR Wā Tuturu | B001P-01 | 48 nga whakamatautau / kete | Serum/ Lesion Exudate | 12 Marama | -25～-15℃ |
